短暂性脑缺血发作患者清脑通络方治疗前后血浆CD41/CD42b表达的临床意义

【摘要】 目的观察短暂性脑缺血发作(TIA)患者治疗前后血小板膜糖蛋白CD41、CD42b表达的变化。方法采用随机对照试验，观察病例338例，分为清脑通络方组163例，阿司匹林组175例。观察清脑通络方和阿司匹林肠溶片治疗前后TIA患者血浆血小板膜糖蛋白CD41、CD42b表达的变化。应用流式细胞术，测定TIA患者的CD41、CD42b的分子表达。结果两组均有显著降低TIA患者血小板膜糖蛋白CD41表达作用，对CD42b的表达无明显影响；治疗后两组血流变指标有明显改善。结论清肝活血治疗对TIA患者血小板膜糖蛋白CD41表达有显著抑制作用，能明显改善TIA患者的血流变指标。

【关键词】 短暂性脑缺血发作； CD41； CD42b

　　Abstract:ob[x]jectiveTo study the correlativity of platelet membrance glycoprotein CD41 and CD42b ex[x]pression in patients with TIA before and after Qing Nao Tong Luo Fang therapy．MethodsThe ex[x]pressions of platelet CD41、CD42b were determined by flow cytometry and hemorheological indexes in 338 patients with TIA before and after therapy with Qing Nao Tong Luo Fang and aspirin.There were 163 patients in Qing Nao Tong Luo Fang group and 175 patients in aspirin group．ResultsCD41 levels in two groups were significantly lower after therapy than before(P<0.05), CD42b levels in two groups did not significantly change. There was no difference between the patients in Qing Nao Tong Luo Fang group and in aspirin group(P>0.05)．Ameliorate hemorheological indexes changed obviously.ConclusionQing Nao Tong Luo Fang therapy can inhibit platelet CD41 ex[x]pression in patients with TIA and improve the ameliorate hemorheological indexes.

　　Key words:Transient ischemic attack； CD41； CD42b

缺血性中风不但发病率高，而且病死率、致残率、复发率均很高，绝大多数中风在发病前的一段时间（数月乃至数年）有先兆表现，称为短暂性脑缺血发作，中医称为中风先兆证。在全国中医脑病专家张学文教授指导下，我们通过多年临床观察，表现肝热血瘀是中风先兆证的主要病理机制。本研究应用张学文教授经验方“清脑通络方”治疗TIA，观察该方对TIA患者血小板膜糖蛋白CD41、CD42b表达的影响和对血流变指标的影响。现总结如下。

　　1 临床资料

　　1.1 病例选择

　　诊断标准参照1995年中华医学会第四次全国脑血管病学术会议TIA诊断要点［1］:①为短暂的、可逆的、局部的脑血液循环障碍，可反复发作，少者1～2次，多者数十次；②可以表现为颈内动脉系统和（或）椎-基底动脉系统症状和体征；③每次发作持续时间通常在数分钟至1 h左右，症状和体征应在24 h以内完全消失。凡年龄40岁以上，80岁以下，符合TIA诊断标准，且知情同意者可纳入本观察。排除标准：已发生脑卒中者；合并有心、肝、肾、造血系统和内分泌系统等严重原发性疾病（包括心房纤颤、心力衰竭、肝功衰竭、肾功衰竭、风湿性疾病等）；精神病患者；有阿司匹林禁忌者。

　　1.2 一般资料

　　选择20030301～20041231在广东省中医院神经内科门诊就诊的TIA病人。本组设计观察病例400例，终完成病例338例，脱落62例。随机分为两组，治疗组（清脑通络方）163例，其中男101例，女62例；平均年龄（52.71±7.38）岁。对照组（阿司匹林）175例，其中男103例，女72例；平均年龄（51.91±6.84）岁。两组年龄、性别、TIA发作类型、发作频度及治疗前病程无显著差异，具有可比性。

　　1.3 试剂及仪器

　　①荧光素标记的血小板单克隆抗体：双标试剂CD41-FITC/CD42b-PE，同型对照IgG1-FITC/-PE（均购自美国Caltag公司）；②仪器为美国Beckman Coulter公司流式细胞仪，型号为ELITE ESP型，激光光源为15 mW的氩离子激光。

　　2 治疗方法

　　2.1 基础治疗两组在试验性治疗期间均进行常规降压、降脂、降糖治疗，均不使用其他活血化瘀药物、抗血小板药物、抗凝药物。

　　2.2 治疗组在基础治疗上加服清脑通络方颗粒剂（单味药颗粒剂由江苏江阴中药厂生产）。组成：决明子0.5 g（相当于生药10 g），丹参2 g（相当于生药10 g），山楂3 g（相当于生药10 g），赤芍1.5 g（相当于生药10 g），川芎2 g（相当于生药6 g），水蛭0.5 g（相当于生药3 g），1剂/d，晨起用温开水冲服，1次/d，连续服药30 d。

　　2.3 对照组口服阿司匹林肠溶片（德国拜尔制药公司），100 mg/次，每天早晨1次，连续服药30 d。

　　2.4 观察指标观察治疗前和治疗后两组患者血小板膜糖蛋白CD41、CD42b表达和血流变指标变化。

2.4.1 CD41、CD42b检测治疗前和治疗后采病人外周血1 ml，EDTA抗凝，样品管加10 μl双标抗体 + 100 μl PBS + 5 μl全血；对照管加10 μl同型对照抗体 + 100 μl PBS + 5 μl全血，样品管和对照管轻轻混匀，室温避光孵育15 min；样品管和对照管均加入2～3 ml含1%多聚甲醛的PBS终止反应，上机检测。以CD41和CD42b 的前向及侧向角光散射双参数设血小板门，取血小板细胞群，计数CD41、CD42b阳性细胞百分比。

　　2.4.2 血液流变学检测治疗前和治疗后清晨用硅油处理的肝素锂抗凝管空腹采肘静脉血4 ml，摇匀，送我院检验科检测全血粘度，血浆粘度，血小板粘附率。

　　2.5 统计学处理所有数据以±s表示，以t检验进行统计学处理，用PEMS统计分析软件完成处理过程。

　　3 结果

　　3.1 两组治疗前后血小板膜糖蛋白CD41和CD42b表达比较结果

　　见表1。表1 两组治疗前后血小板膜糖蛋白CD41和CD42b表达比较（略）

清脑通络方组和阿司匹林组治疗后血小板膜糖蛋白CD41表达百分率和平均荧光强度均明显降低（P<0.05），CD42b表达百分率和平均荧光强度无明显变化（P>0.05）。

　　3.2 两组治疗前后血液流变学指标变化比较

　　结果见表2。表2 两组治疗前后血液流变学指标变化比较（略）

两组治疗后血液流变学各项指标均有改善，与治疗前比较，差异有显著性意义（P<0.05或P<0.01）。治疗后治疗组降低全血高切粘度与对照组比较，差异有非常显著性意义（P<0.01）。

　　4 讨论

急性脑血管病是威胁人类健康的三大疾病之一，具有发病率高、致残率高的特点，给社会和家庭带来沉重的负担。我国每年新发脑血管疾病约200万例，其中缺血性中风约占中风总数的55%～80%。抗血小板治疗是有效预防中风的主要手段之一［2］。然而，许多患者虽然一直坚持服用抑制血小板聚集的阿司匹林，但仍不能完全预防中风,这种现象与阿司匹林抵抗有关［3］。缺血性中风危险因素和病因较多，缺血性中风的预防应针对不同的病因和危险因素进行综合预防［4］。

我们临床研究发现，“肝热血瘀”是导致缺血性中风的根本原因，治疗上应用清肝和血治法自拟清脑通络方治疗中风先兆证，该方主要由决明子、丹参、山楂、赤芍、川芎、水蛭等药物组成，具有清肝和血、化瘀通络功效［5］。我们以往的研究表明，清脑通络方对降低TIA发作和预防中风发生有明显作用，尤其在改善TIA患者临床症状方面作用显著，能显著改善患者眩晕、头痛、肢体麻木、失眠之临床症状是该药的显著特点，明显优于阿司匹林，清脑通络方具有明显降低TIA患者TIA发作次数，预防和延缓TIA患者发生中风的进程［6］。

　　血小板膜糖蛋白GP IIb／IIIa(CD41／CD42b) 是血小板膜上含量多的糖蛋白，该复合物是一个完整的功能单位，与胶原、vWF因子、纤维连接蛋白和玻璃体连接蛋白结合，发生血小板的粘附和聚集，此为血小板聚集、粘附和血小板血栓形成的终关键步骤，是缺血性事件发生的重要环节，因此，CD41的表达可作为预测血栓性疾病的指标。研究显示脑梗死患者血小板CD41表达较对照组增高，我们利用流式细胞术检测TIA患者CD41的表达，也发现CD41平均荧光强度和表达百分数较对照组显著升高，经清脑通络方治疗后CD41平均荧光强度和表达百分数显著降低。 CD42b是血小板的主要糖蛋白之一，静息时均匀分布在整个血小板膜表面，是凝血酶的受体，当血小板被激活时，CD42b迅速从膜表面转移到中央管中，导致膜表面含量减少。本研究显示，TIA患者治疗前后CD42b无明显变化（P>0.05）。

　　本研究表明，清脑通络方能明显抑制血小板CD41的表达，降低血小板粘附性，降低全血粘度和血浆粘度，因此，在治疗TIA和预防缺血性脑血管病方面有明显疗效。

【参考文献】
　［1］史玉泉.实用神经病学,第2版［M］.上海：上海科技出版社1994：641.

　　［2］Tran H,Anand SS. Ora1 antiplatelet therapy in cerebrovascular disease，coronary artery disease，and peripheral aneria1 disease．JAMA, 2004,292：1867.

　　［3］Hankey GJ．Eikelboom JW．Aspirin resistance。 BMG，2004,328：477.

　　［4］谢雁鸣,宇文亚,王永炎.缺血性中风的二级预防及中医药应用述评［J］.时珍国医国药,2008,19(11):2730.

　　［5］张学文,陶根鱼.中风先兆证发病规律的研究［J］.中国中医急症,1993,2 (1):7.

　　［6］华荣,孙景波, 齐绒芳,等.清脑通络方治疗短暂性脑缺血发作（肝热血瘀型）163例疗效观察［J］.新中医,2006,38(7):14.