大肠癌中环氧化酶-2和生存素的表达与肿瘤血管生成的关系

　    作者：朱正日　　作者单位：佳木斯大学附属医院，黑龙江 佳木斯
      Relationship between the ex[x]pression of cycloxygenase-2 and Survivin and the vascularization in cancer of colon　　ZHU Zhengri，AI Yingchun，LI Chunmei　　(The First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154003,China) Abstract:ob[x]jective:To investigate the relationship between the ex[x]pression of cycloxygenase-2 and Survivin and the vascularization in colon cancer and their correlation with tumor microvessle density.Method:The streptavidin-peroxidase-biotin immunohistochemistry technique was used to detect the ex[x]pression of COX-2，Survivin and MVD(labled by CD34) in 48 cases of colon cancer specimens.The statistical analysis was used for the relationship among the ex[x]pression of COX-2,Survivin and MVD and the clinicopathological features in colon cancer.Results:(1)The positive ex[x]pression rate of COX-2 and Survivin in colon cancer was signifficantly correlated with Dukes staging(P<0.0l).(2)There was a positive correlation between the ex[x]pression of COX-2 and Survivin in colon cancer.(3)The MVD in COX-2 positive group was higher than that in COX-2 negative group,and the MVD in Survivin positive group was higher than that in Survivin negative group,with a significant difference(P<0.0l,P<0.01);The MVD in both positive groups of COX-2 and Survivin was higher than that in both negative groups, with a significant difference(P<0.01).Conclusion:COX-2 and Survivin play a key role in the development of colon cancer,and might synergistically promote the formation of the blood vessel in colon cancer.

　　Key words： cancer of colon;COX-2;Survivin;MVD;tumor vessel;immunohistochemistry

　　大肠癌是世界上常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着人类的生命健康。近20多年来随着生活水平的提高，以及饮食结构的改变，我国大肠癌的发病率呈明显上升趋势，肿瘤细胞的扩散转移是肿瘤患者死亡的重要原因，肿瘤的血管生成已逐渐引起人们的重视。本研究对大肠癌中COX-2和Survivin的表达与MVD进行了检测，旨在探讨它们在大肠癌中的表达与肿瘤血管生成的关系。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　采用佳木斯大学附属医院2006—08～2007—12手术切除的大肠癌标本48例。术前均未做放疗、化疗、免疫治疗。其中男28例，女20例;<60岁者18例，≥60岁者30例;肿瘤直径<5cm者22例，≥5cm者26例;直肠癌患者31例，结肠癌患者17例;高分化腺癌18例，中分化腺癌17例，低分化腺癌13例; Dukes分期A期7例，B期14例，C期16例，D期11例。20例腺瘤性息肉和20例大肠正常黏膜作为对照组。

　　1.2 方法

　　采用S-P免疫组化染色法，S-P试剂盒均由福州迈新生物技术有限公司提供。所有标本均为10%中性福尔马林固定常规石蜡包埋，连续2μm切片。用已知阳性组织切片作阳性对照，每个指标以PBS液代替一抗作阴性对照。

　　1.3 结果判定

　　①COX-2阳性染色主要定位于细胞浆 ，为棕黄色颗粒。阳性判断标准：选择5个高倍视野进行计数，根据染色强度和染色细胞百分率进行综合评分：基本不着色为0分，细胞染色呈浅黄色为1分;细胞染色呈棕黄色为2分;细胞染色呈棕褐色为3分;着色细胞占计数细胞百分率,<5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分,≥ 51%为3分。将每张切片平均着色强度得分与平均着色细胞百分率得分各自相乘，为其后得分:得0～1分为阴性(-)，2分以上者为(+)。 Survivin阳性染色主要定位于细胞浆 偶见细胞核表达,为棕黄色颗粒。阳性判断标准如上。②CD34结果及MVD判定标准：先在低倍光镜(×100)下选取3个微血管多的视野，即热点区(hot spot)，再于高倍镜(×200)视野下计数微血管的数目，求得3个视野的均值作为MVD。

　　1.4 统计方法

　　采用SPSS13. 0统计软件包进行统计学分析。计量资料分析采用t/t’检验，计数资料比较用χ2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析。MVD值以均数±标准差(x±s)表示。

　　2 结果

　　2.1 COX-2和Survivin在大肠癌中的表达与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位以及分化程度均无关(P>0.05),而与Dukes分期密切相关(P<0.05)。见表1，表1 大肠癌中COX-2表达与临床病理特征的关系(略0

　　2.2 COX-2或Survivin表达阳性组的MVD值明显高于COX-2或Survivin表达阴性组，COX-2和Survivin均呈阳性时MVD值高，COX-2和Survivin均呈阴性时MVD值低，经检验差异显著(P<0.01)。相关分析表明COX-2和Survivin呈正相关。见表2。表2 大肠癌中COX-2和Survivin的表达与MVD的关系(略)

　　3 讨论

　　肿瘤的生长和转移依赖于新生血管的支持，没有新生血管供给氧和营养物质，肿瘤直径不会超过2mm，一旦新生血管长入肿瘤组织，肿瘤细胞加速生长，并易侵入血管而发生远处转移。环氧化酶-2(COX-2)是分解花生四稀酸，合成各种前列腺素(PG)的一个重要限速酶。研究表明它通过促进肿瘤细胞的增殖[1]、抑制凋亡[2～4]、促进肿瘤新生血管生成[5～7]等机制参与多种肿瘤的发生和发展。本研究结果显示大肠癌中COX-2表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、分化程度之间无统计学差异(P>0.05)，而与Dukes分期密切相关(P<0.05)。与国内外报道相比，COX-2与大肠癌临床病理特征的关系与大多数学者结果基本一致。COX-2与大肠癌Dukes分期密切相关，提示COX-2高表达可以影响大肠癌的生物学行为，可使其更易发生转移等恶性行为，可能是预后不良的指征。Survivin是新近克隆出的凋亡抑制蛋白家族的新成员，研究表明Survivin可能通过抑制细胞凋亡、调节细胞周期，参与肿瘤新生血管形成促进了肿瘤的发生发展。目前, 有关Survivin 蛋白和大肠癌临床因素关系的研究报道较少, 结论也并不一致。本研究结果显示，大肠癌中Survivin表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、分化程度之间无统计学差异(P>0.05),而与Dukes分期密切相关(P<0.01)。Survivin与大肠癌的临床分期有关，提示Survivin在大肠癌的发生发展中可能起着重要作用，Survivin的高表达促进了大肠癌的转移潜能，也是大肠癌预后不良的因子之一。本实验进一步研究了COX-2和Survivin与大肠癌MVD的关系后发现，COX-2或Survivin表达阳性组的MVD值明显高于COX-2或Survivin表达阴性组，表明COX-2和Survivin都参与了肿瘤血管的生成。COX-2、Survivin在大肠癌中表达共同阳性组MVD值明显高于共同阴性组，差异显著(P<0.01)，提示COX-2与Survivin在大肠癌血管生成过程中可能存在着某种共同的调节机制，二者协同促进了大肠癌内血管的生成。我们推测肿瘤内COX-2的表达上调了以VEGF为代表的促血管生长因子的表达，而后者的高表达又刺激了肿瘤内Survivin表达上调，Survivin的高表达促进了肿瘤血管内皮细胞的抗凋亡作用，有利于内皮细胞的增殖及小血管网结构的维持，终COX-2, Survivin在肿瘤血管生成过程中共同起着重要作用。因此我们认为联合检测两项指标有助于进一步认识肿瘤发生发展的机制，并有可能为抗肿瘤血管生成治疗提供新的理论依据。