【关键词】 半薄切片 染色液
电镜是观察组织细胞超微结构的一种手段。但由于切片太小，有时难于观察到目标结构，为此需大量制备样品造成工作量大且消耗多。为使超薄切片能精确地切到目标部位，在行超薄切片前要做半薄切片进行定位。一般是在超薄切片机上切取数张１～２ μｍ厚的切片进行染色观察。半薄切片的染色常规方法有：甲苯胺兰染色法、天青Ⅱ美兰染色法、ＨＥ染色法和Ｇｉｅｍｓａ染色法等，无论哪种方法都需预先做脱树脂处理，否则染料不宜渗入，影响染色效果。为提高电镜观察的准确性，通过多年实践，我们对常用的甲苯胺兰染色液进行了改良，在甲苯胺兰染色液中适当添加硼砂并应用于半薄切片的染色［１］，取得了满意效果，现将方法介绍如下。
１ 材料与方法
取经透射电镜常规Ｅｐｏｎ８１２树脂包埋后的组织块于超薄切片机上，切片厚度为１～２ μｍ的半薄切片，将其转移至涂有蛋白甘油的载玻片上，与３７℃烘箱内烤干。将硼砂甲苯胺兰染液滴在切片上染色５ min，用蒸馏水冲洗切片上多余的染液，自然干燥，光学显微镜观察。硼砂甲苯胺兰染液的配制：分别称取甲苯胺兰（北京化工厂生产）１ ｇ ，硼砂１ ｇ（沈阳化学试剂厂生产），用１００ ｍｌ去离子水先加入硼砂加热溶解，后加甲苯胺兰，ＮＯ.１滤纸过滤备用。
２ 结果
与常规电镜半薄切片染色液相比经硼砂甲苯胺兰染色的切片经光镜观察见组织细胞核被染成深蓝色，胞浆被染成淡蓝色，结构层次清楚，包埋剂并无着色。
３ 讨论
为克服电镜观察视野局限的缺点，一般在超薄切片前要进行半薄切片以确定所要观察的结构，染色良好的半薄切片应能够提供石蜡切片难以分辨的细节。而常规的半薄切片染色前，要先行脱树脂处理，其过程是将干燥切片插入氢氧化钾无水酒精饱和溶液１０～１５ min后，无水酒精洗三次，经梯度酒精下行，水洗后染色。否则染料不宜渗入而影响染色效果［２］。即繁琐又费时，所以选择理想的染色剂非常重要。甲苯胺兰是常用的人工合成染料，有两个发色团和两个助色团。发色团是使染料呈现颜色的基团，而助色团是能促使染料产生电离成盐类，帮助发色基团对组织产生染色力的基团。甲苯胺兰是一种碱性染料，其中的阳离子有染色作用。组织细胞中的酸性物质与其中的阳离子结合而被染色。常规的甲苯胺兰染色液是以磷酸缓冲液（ｐＨ７.２）为溶剂呈弱碱性，而硼砂（Ｎａ２Ｂ４Ｏ７·１０Ｈ２Ｏ）水溶液呈强碱性（ｐＨ９.３）。以其代替磷酸缓冲液配制的甲苯胺兰染色液，大大提高了组织细胞的着色力。比较改良前后的两种甲苯胺兰染色液，改良后的染色液不仅不需脱树脂等繁琐步骤而省时，组织细胞的结构更清晰。特别适合于临床活检标本需要在短时间内确定目标部位，提高临床电镜诊断的准确性和效率。改良后的染色液在应用过程中应注意的几个问题：①由于温度对染料的着色力有很大影响，染色过程中可适当加温７０～８０℃，使着色更牢固。②染色后以水洗为好，酒精可使碱性染料脱色所以不能用酒精脱水。③由于改良后的染色液的配制不使用磷酸缓冲液，所以即使长期室温保存也不产生沉淀。
【参考文献】
［1］应国华．医学·生物学电镜技术与细胞超微结构［Ｍ］．香港：香港现代出版社，１９９３．２４－２５．
［2］杭振镳，蔡文琴．电子显微镜术在临床医学的应用 ［Ｍ］．重庆：重庆出版社，１９８８．２４－２６．
