Alagille综合征2例临床特征及JAG1基因分析 2

1.2 JAG1基因检查方法

抽取患者外周静脉肝素抗凝血2mL，采用全血基因组DNA提取试剂（北京天根生物有限公司），操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。外周血标本DNA抽提前，患儿家属均填写知情同意书，本研究获得南京市儿童医院医学伦理委员会批准。采用Primer5软件设计25对引物扩增JAG1基因编码蛋白的26个外显子及其侧翼序列和启动子区序列，由美国Invitrogen（英骏，美国）公司合成。引物设计见表1。 PCR反应总体积为50μL，包括10×PCR缓冲液 5μL，脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP) 200 mol/L，引物 10 μmol/L，基因组DNA 100 ng，Taq DNA聚SU。PCR反应条件：94℃预变性4min，94℃变性30 s，退火温度 30 s，72℃延伸30 s，40次循环后，72℃延伸10min。PCR产物纯化回收后，以BigDye Temunator（应用生物系统公司，美国）进行产物标记，精制纯化后用ABIPrism 3100基因分析仪测序。测序结果与基因库中的标准序列NG007496和已报道的单核苷酸多态性(SNP)位点进行比对，判定变异位点。

2结果
2.1临床表现例1临床表现为慢性胆汁淤积、心脏 杂音和特殊面容，肝功能示ALT、AST升高，高GGT、高胆汁酸及高脂血症，肝穿刺病理示胆管上皮缺乏。例2临床表现仅包括慢性胆汁淤积和特殊面容，肝功能异常伴高GGT、高胆汁酸及高脂血症。

2.2．AG1基因组外显子区域测序结果例1患儿为 JAG1基因6号外显子c．809—809delG杂合突变， p．G270Dfs 142，使809位鸟嘌呤(G)缺失，导致270位 氨基酸序列全部混乱，发生框移，为报道的突变，见 图3A。例2患儿为第20内含子IVS20-2_5delTAAG杂 合突变，导致剪切位点改变，为已知突变，见图3B。