摄入石榴汁的时间长短对衰老小鼠 抗氧化功能的影响

【摘要】  探讨石榴果汁在衰老小鼠体内的抗氧化功能。方法 取72只老龄小鼠，雌雄各半，将动物按体重随机分为高剂量组、低剂量组、对照组，剂量组每日分别按照20?mL/kg石榴汁、10?mL/kg石榴汁进行灌胃，对照组按20?mL/kg蒸馏水进行灌胃。分别于第1、2、3、4周结束时每组取6只小鼠拔眼球取血并脱臼处死，3?500?r/min离心15?min后分离血清，立即装于eppendorf管中，置-20?℃保存待用测定总抗氧化能力（TAOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)、丙二醛（MDA）；并取肝脏快速冷冻用于TAOC、SOD、GSHPX、MDA的测定。结果 与对照组比较，前两周高剂量组小鼠与对照组小鼠的总抗氧化能力的差异无统计学意义，第3周两者的差异开始有统计学意义。高剂量组和低剂量组小鼠血清和肝脏总抗氧化能力、SOD和GSHPX活力显著提高；血清和肝脏MDA含量降低不明显。高剂量组作用较低剂量组显著。结论 石榴汁具有良好的抗氧化功能，随着石榴汁摄入时间的延长，衰老小鼠机体的抗氧化水平逐渐增强。

【关键词】  石榴 总抗氧化能力 超氧化物歧化酶 谷胱甘肽过氧化物酶 丙二醛

    different times on aging mice

    ZHANG Jie, XU Guifa

    （Institute of Nutrition and Food Hygiene, School of Public Health,

    Shandong University, Jinan 250012,  China）

    Abstract: ob[x]jective  To explore the antioxidation effect of pomegranate juice on aging mice. Methods  72 aging mice, half female and half male, were randomly divided into three groups: the high dose group, the low dose group and the control group. Pomegranate juice or water was given orally every day at the following doses of 20?ml/kg pomegranate juice, 10?ml/kg pomegranate juice and 20?ml/kg distilled water.  6 mice from each group were taken, their eyeballs were removed, and they were executed with luxation at the end of the first week, the second week, the third week and the fourth week. Blood serum was separated after 3?500?r/min centrifugalization for 15 minutes, and was conserved under refrigeration for determining the total antioxidation capability (TAOC), superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSHPX) and malonaldehyde (MDA). Also the liver was obtained and frozen for determining the TAOC, SOD, GSHPx and MDA. Results  Compared with the control group, the disparity of TAOC between the high dose group and the control group was not significantly different at the first two weeks, and it began to have significant differences from the third week. TAOC, SOD and GSHPX of blood serum and liver in the high dose and the low dose groups remarkably increased. The content of MDA of blood serum and liver degraded with no significant effect. There was a more noticeable effect in the high dose group than in the low dose group. Conclusion  Pomegranate juice possesses antioxidative  capability, which is gradually elevated in aging mice with the intake of pomegranate juice. Key words: Pomegranate; Total antioxidation capability;  Superoxide dismutase;  Glutathione peroxidase;  Malonaldehyde     石榴为石榴科石榴属食物，是一种既具有食用价值又具有药用价值的果中［1］。研究发现石榴中含有大量具有抗氧化作用的黄酮类化合物［2］249。用石榴酿制的酒比葡萄酒含有的抗氧化物质浓度更高。近几年来，国内外均已初步展开石榴在抗氧化方面的研究。结果显示，石榴果汁或果汁提取物能够有效地清除羟自由基和超氧阴离子自由基，抑制低密度脂蛋白(lowdensity lipopritein, LDL)和脂质过氧化，抑制动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）的形成,具有很强的抗氧化功能［3］。目前已有的研究大多数是关于石榴提取浓缩物的体内外抗氧化作用。实际上石榴汁中含有多种抗氧化活性物质，如鞣花酸、花青素、维生素C等，这些抗氧化活性物质对石榴汁的抗氧化功能都有作用。已有研究表明石榴汁对衰老大鼠体内的抗氧化功能具有较强的干预作用［4］82，但尚未有研究表明石榴汁摄入时间的不同对衰老机体内抗氧化能力的影响是否不同，推测衰老机体内抗氧化能力是随着石榴汁摄入时间的延长而逐渐增强的。

    本研究以老龄小鼠为研究对象，研究了石榴汁摄入时间不同对衰老小鼠抗氧化功能的不同影响。

    1  材料与方法

    1.1  实验动物  清洁级健康老龄昆明种小鼠（12月龄，常规饲养，购于山东大学实验动物中心）72只，体重40 50?g。按体重和性别分为三组，每组24只,雌雄各半。

    1.2  实验方案  三组小鼠分别为高剂量组、低剂量组、蒸馏水对照组。购买山东济南市售石榴手工去皮，将石榴果粒置于榨汁机内榨汁，榨汁后去除石榴籽，取石榴汁过滤。高剂量组按20?mL/kg石榴汁, 低剂量组按10?mL/kg石榴汁，对照组按20?mL/kg蒸馏水进行灌胃。实验周期为4周，自由摄食、饮水，分别于第1、2、3、4周结束时每组取6只小鼠拔眼球取血并脱臼处死（雌雄各半），血样静置30?min后，3?500?r/min离心15?min后分离上清，立即装于eppendorf管中，冷冻保存待用。同时取肝脏快速冷冻待用。

    1.3  指标测定  取肝组织称重后加入适量生理盐水，冰浴中用玻璃匀浆器制备1∶10的匀浆。血清和肝匀浆总抗氧化能力（total antioxidation capability, TAOC）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶(gluthathione peroxidase, GSHPX)、丙二醛（malonaldehyde, MDA）的测定均采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒，严格按照说明书操作。

    1.4  统计学处理  所有数据均以

2  结  果

    2.1  石榴汁对小鼠血清各抗氧化指标的影响  见表1。随着时间的延长，剂量组小鼠血清总抗氧化能力活性增加，见图1。SOD和GSHPX活性增加，表1  石榴汁对老龄小鼠血清TAOC、SOD、GSHPX和MDA的影响（*MDA含量降低。高剂量组第3周、第4周与第1周的总抗氧化能力的差异均有显著统计学意义；实验期间第3周和第4周，高剂量组与对照组的总抗氧化能力之间的差异均有统计学意义。高剂量组第3周、第4周的GSHPX与第1周的GSHPX的差异有统计学意义。各时间组之间与各剂量组之间血清MDA含量差异均无统计学意义。

    2.2  石榴汁对小鼠肝脏各抗氧化指标的影响  见表2。随着时间的延长，剂量组小鼠肝脏总抗氧化能力增加， 见图2。肝脏SOD和GSHPX活性增加，MDA含量降低。高剂量组第3周和第4周的总抗氧化能力与第1周总抗氧化能力之间的差异均有显著统计学意义； 实验期间第3周、第4周， 高剂量组与对照组之间的总抗氧化能力的差异具有统计学意义。第4周高剂量组、低剂量组肝脏的SOD与对照组肝脏的SOD之间的差异均有显著统计学意义。高剂量组第4周的GSHPX与第1周GSHPX之间的差异有统计学意义，与对照组之间的差异有显著统计学意义。各时间组之间与各剂量组之间肝脏MDA含量的差异均无统计学意义。  表2  石榴汁对老龄小鼠肝脏TAOC、SOD、GSHPX和MDA的影响

    *3  讨  论

    近几年来，石榴的抗氧化功能已成为国内外研究的热点。已有实验表明，石榴的油和汁含有大量的黄酮类化合物，具有很强的抗氧化能力［2］249，有研究证明，石榴汁与其它水果相比具有很强的抗氧化能力［5］。但尚未有研究表明石榴汁对衰老机体抗氧化能力的影响随着时间的变化趋势。本研究以老龄小鼠为研究对象，进一步探讨了石榴汁摄入时间不同对于衰老机体抗氧化能力的影响，证明了随着石榴汁摄入时间的延长，衰老机体抗氧化功能逐渐增强。

    抗氧化能力，亦指氧自由基吸收能力，能够反映机体总的抗氧化活性［6］。由图1和图2可见，老龄小鼠血清及肝脏中总抗氧化能力均随着时间延长呈现出增加的趋势，并且同一时间点剂量组的总抗氧化能力高于对照组，表明石榴汁能够增强机体的总抗氧化能力，从而可以有效地改善机体的抗氧化防御功能，并且高剂量组的总抗氧化能力高于低剂量组，说明不同剂量的石榴汁对小鼠的总抗氧化能力的影响存在差异。

    由表1和表2可见，血清及肝脏SOD与GSHPX均随着时间的延长而呈现出增加的趋势。在整个实验过程中，有时随着时间的延长，剂量组反而会出现SOD和GSHPX活性略有降低的现象，具体原因仍待进一步考察。MDA是脂褐素形成过程的中间产物，它能反映机体内脂质过氧化水平［7］。MDA含量可反映组织细胞脂质过氧化的速率和强度，间接反映细胞的损伤程度，其含量越高，生物膜破坏越严重。本次研究中，血清及组织中的MDA含量随着时间的延长均呈现降低的趋势，但同一时间各个实验组之间以及同一实验组各个时间点之间差异均未有统计学意义。

    本次研究结果表明，石榴汁干预可以提高老龄小鼠血清和肝脏总抗氧化能力，升高SOD、GSHPX的活性，降低MDA含量，提示石榴汁能够提高衰老小鼠机体的抗氧化能力，并且抗氧化能力是随着时间的延长而逐渐增加的。以色列阿维拉姆教授的研究证实［8］，如每天饮用2到3盎司石榴汁，连续饮用2周，可将氧化过程减缓40%。国内有研究采用老龄大鼠作为研究对象，每日给予石榴汁3.2?mL,四周后石榴汁组大鼠总抗氧化能力与蒸馏水组大鼠总抗氧化能力的差异有统计学意义［4］82。本研究探讨了随着石榴汁摄入时间的延长机体内抗氧化能力的变化，实验期间第1、2周高剂量组小鼠的总抗氧化能力与对照组小鼠的总抗氧化能力之间的差异没有统计学意义，第3周两者的差异开始出现统计学意义。本实验研究已经发现较短时间的石榴汁摄入对小鼠的各抗氧化能力的指标无显著性影响，一段时间后显著性影响才出现。究竟每日需饮用多大剂量的石榴汁以及饮用多长时间会对人体的抗氧化作用产生显著影响仍待进一步研究。研究发现石榴汁中的多酚含量相当高，测定100?mL石榴汁多酚总含量高达114.93?mg［4］82。多酚以大量的酚羟基作为氢供体，对多种活性氧具有清除作用，是很好的天然抗氧化剂［9］。石榴汁所含的多酚类物质可能是其重要的功能成分，但也不排除多种抗氧化成分之间通过相加或协同作用发挥生理功能。石榴汁中含有哪些主要的有效成分及它们的含量，也待进一步研究。

【参考文献】
  ［1］ 高翔.石榴的营养保健功能及其食品加工技术［J］.中国食物与营养, 2005, 2(7):4042.

［2］ 姚立华，何国庆，陈启和.石榴生物活性成分研究进展［J］.食品科技, 2006, 31(11).

［3］ Li Y F, Guo C J, Yang J J, et al. Evaluation of antioxidant properties of pomegranate peel extract in comparison with pomegranate pulp extract［J］. Food Chemistry, 2006, 96(2)：254260.

［4］ 徐静，郭长江，杨继军，等.不同抗氧化活性水果汁对老龄大鼠抗氧化功能的干预作用［J］.中华预防医学杂志, 2005, 39(2).

［5］ Guo C J, Yang J J, Wei J Y, et al. Antioxidant activities of peel, pulp and seed fractions of common fruits as determined by FRAP assay［J］. Nutr Res, 2003, 23(12):17191726.

［6］ 许丹,朱明元,罗莉,等.白藜芦醇对衰老小鼠肝脏抗氧化能力影响［J］.中国公共卫生, 2006, 22(4):467468.

［7］ 裴凌鹏，常铮，金宗濂. 葛根黄酮改善老龄小鼠抗氧化功能的研究［J］.营养学报, 2004, 26(6):505506.

［8］ Aviram M, Dornfeld L, Rosenblat M, et al. Pomegranate juice consumption reduces oxidative stress, atherogenic modifications to LDL, and platelet aggregation: studies in humans and in atherosclerotic apolipoprotein Edeficient mice［J］. Am J Clin Nutr, 2000, 71(5):10621076.

［9］ 齐继成.植物多酚的开发应用前景［J］.中国制药信息，2006，22(6):2024.

作者：张洁

作者单位：山东大学公共卫生学院营养与食品卫生研究所， 济南 250012