李小钢 付静 赵克熹 史春祥
【摘要】 目的 探讨P16蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)及癌旁组织中的表达及临床意义。方法 采用SP免疫组化方法测定P16蛋白在64例NSCLC及癌旁1~2cm组织中的表达。结果 P16蛋白的阳性表达主要位于细胞胞浆,部分同时出现于胞核。P16蛋白在NSCLC中的表达率为40.6%,在癌旁组织中的表达率为74.4%,与NSCLC的分化程度及患者术后生存期有关(P<0.05),而与组织学类型及有无局部淋巴结转移无明显关系(P>0.05)。结论 P16蛋白表达缺失可作为临床判断NSCLC的分化程度及预测患者预后的参考指标。
【关键词】 非小细胞肺癌 P16蛋白 免疫组化
The ex[x]pression of P16 protein in non-small cell lung cancer and its clinical significance
Li Xiaogang Fu Jing Zhao kexi
(Department of Thoracic Surgery,Haidian Hospital,Beijing 100080)
【Abstract】 ob[x]jective To elucidate the ex[x]pression of P16 in non-small cell lung cancer (NSCLC) and the tissue adjacent to carcinoma and its clinical significance.Methods Streotavidin perxidase immunohistochemical staining method was used to examine the ex[x]pression of P16 in 64 NSCLC and the tissue adjacent tocarcinoma.Results The ex[x]pression of P16 protein was mainly located in cytoplasmin.The positive rate of P16 protein in NSCLC was 40.6%,much lower than 74.4% in the tissue adjacent carcinoma.The positive rate of P16 protein was related to the degree of differentiation and prognosis (P<0.05),but it not correlate with lymph node me[x]tastasis and histologic type (P>0.05).Conclusions The absence of P16 protein ex[x]pression may be con-sidered as a parameter for judging the degree of differentiation of NSCLC and clinical prognosis.
【Key words】 NSCLC P16 protein Immunohistochemistry
P16基因是近年来发现的一种新的肿瘤抑制基因,其与肿瘤发生的关系在已有的多种肿瘤的研究中已得到证实。我们用SP免疫组化方法,探讨P16基因编码的P16蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)及癌旁组织中的表达及其临床意义。
材料与方法
1.收集本院及中日友好医院病理科1992年7月至1998年8月手术切除之肺癌标本,经病理证实为原发性非小细胞肺癌,其中鳞癌41例,腺癌17例,腺鳞癌6例。
2.方法:免疫组化采用SP方法,P16单克隆抗体和SP试剂盒均为北京中山生物技术公司提供的ZYMED公司产品。P16抗体稀释度为1∶100,切片经0.4%胃酶消化及枸橼酸盐缓冲液抗原修复后,按SP法染色。
3.结果判断:以细胞出现明显棕色为阳性,阳性细胞<25%为(-),阳性细胞>25%为(+)。
4.统计学处理:采用χ2检验。
结 果
1.P16蛋白的表达:阳性物质主要定位于胞浆,部分出现于胞核。 2.P16蛋白在NSCLC中的表达,见表1。
表1 P16蛋白在NSCLC中的表达(例)
组织学类型 例数 P16(+) P16(-) 阳性率(%)
腺 癌 17 8 9 47.1
鳞 癌 41 15 26 36.7
腺鳞癌 6 3 3 50.0
合 计 64 26 38 40.6
P>0.05
64例NSCLC中,P16蛋白的阳性表达率为40.6%,各组织学类型间无显著性差异(P>0.05)。 3.癌旁1~2cm处支气管腺体及粘膜上皮细胞P16蛋白表达率为74.4%(32/43),明显高于P16蛋白在NSCLC中的表达。 4.P16蛋白的表达与NSCLC分化程度的关系,见表2。 表2 P16蛋白的表达与NSCLC组织学 分级的关系(例)
组织学分级 例数 P16(+) P16(-) 阳性率(%)
高分化 16 10 6 62.5
中分化 24 11 13 45.8
低分化 24 5 19 20.8
合 计 64 26 38 40.6
P<0.05
P16蛋白的表达随NSCLC分化程度的降低而降低,有显著性差异(P<0.05)。 5.P16蛋白的表达与NSCLC患者术后生存期的关系,见表3。 64例NSCLC中有3年以上随访资料的有33例,如表3显示,P16蛋白的表达与肺癌患者术后生存期呈正相关,术后生存期长的患者中,P16蛋白阳性表达高(P<0.05)。 6.P16蛋白的表达与NSCLC淋巴结转移的关系,见表4。 表3 P16蛋白表达与NSCLC患者术后 生存期的关系(例)
术后生存期 例数 P16(+) P16(-) 阳性率(%)
<1年 5 0 5 0
1~3年 16 5 11 32.2
>3年 12 9 3 75.4
合 计 33 14 19 42.4
P<0.05
表4 P16蛋白的表达与NSCLC局部淋巴结
转移情况的关系(例)
淋巴结情况 例数 P16(+) P16(-) 阳性率(%)
有淋巴结转移 25 11 14 44.0
无淋巴经转移 26 9 17 34.6
合 计 51 20 31 39.2
P>0.05
64例NSCLC中,资料提示了淋巴结情况的有51例,表4提示肺癌组织P16蛋白的表达与局部淋巴结转移间无显著相关性(P>0.05)。
讨 论
P16基因于1993年由Serrano等[1]发现并被克隆成功,它编码的P16蛋白可以与CDK4/Cyclin D复合物竞争性结合,从而抑制CDK4/Cyclin D复合物的活性,阻止细胞周期从G1期向S期过渡,在正常细胞周期中起负反馈调节作用。当P16基因突变或丢失时,P16蛋白的合成发生障碍,能引起细胞生长失控,导致癌变[2,3]。 肺癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病率及死亡率都很高。NSCLC占全部肺癌的75%~90%。以往的研究表明,P16基因的突变和丢失在NSCLC的形成及进展中起着较重要的作用,但不是早发事件[4]。我们应用免疫组化SP方法研究了P16蛋白在人原发性NSCLC及癌旁1~2cm肺组织的表达,并分析其与临床病理相关性,结果表明:P16蛋白表达率在NSCLC中明显低于癌旁组织,且与NSCLC的分化程度呈正相关,此结论与国内同类报道相符(P<0.05)[5~7];NSCLC各组织学类型间P16蛋白的阳性表达无显著性差异(P>0.05);伴或不伴局部淋巴结转移的NSCLC P16蛋白的阳性表达无显著性差异(P>0.05);在NSCLC预后方面,我们的研究显示:P16蛋白的表达率与NSCLC患者的术后生存期显著相关,术后生存3年以上的患者组肺癌组织中P16蛋白的阳性表达率明显高于1~3年和1年以下患者组,三组间有显著性差异(P<0.05)。 综上所述,本研究提示:①P16蛋白主要定位于细胞的胞浆,部分同时出现于胞核;②P16蛋白表达缺失与NSCLC的发生及细胞分化不良有关;与NSCLC患者术后生存期有关,可作为临床判断NSCLC的分化程度及预测患者预后的参考指标;③P16蛋白的表达缺失与NSCLC的组织学类型及有无局部淋巴结转移关系不明显。
李小钢(北京市海淀医院胸外科 邮政编码 100080) 付静(北京市海淀医院病理科 邮政编码 100080) 赵克熹(北京市海淀医院胸外科 邮政编码 100080) 史春祥(北京市海淀医院病理科 邮政编码 100080)
参 考 文 献
1,Serrano M,Hunnon GJ,Beach DA.A how regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of Cyclin D/CDK4.Nature,1993,366:704.
2,赵温利,郭卫星,田志刚.肿瘤抑制基因P16的研究进展.国外医学肿瘤学分册,1997,24:199.
3,温桂兰,范希光,饶纬华.肿瘤抑制基因CDKN2与肺癌.中华结核与呼吸杂志,1998,21:198.
4,李伟峰,赵 彤.P16基因与肺癌.国外医学呼吸系统分册,1997,17:5.
5,战雪梅,孙崇伟,王国新,等.肺癌P16蛋白表达及临床意义.诊断病理学杂志,1998,5:89.
6,张尚福,张 声,李 羽,等.肺癌中P16蛋白表达的意义.中华肿瘤杂志,1997,19:259.
7,姜彦多,夏书月,戴晓淳,等.肺癌CDKN2基因产物表达的研究.中华结核和呼吸杂志,1996,19:81.