星形细胞上调基因-1和血管内皮生长因子在胆管癌组织中的表达及其临床意义

         有研究结果表明星形细胞上调基因一I(AF'G-1)是在人类胚胎星形胶质细胞由人类免疫缺陷病毒(HIV)-1或者肿瘤坏死因子(Tl}'F)一.诱导而生成的特殊蛋白u.它的异常表达在许多人类肿瘤中都被证实.新生血管生长并进人肿瘤,为肿瘤提供必要的营养和氧气,还可作为肿瘤转移的途径.AEG-I在肿瘤的发生、发展、转移和血管生成中起重要作用〔5,血管内皮生长因子(VEGF)也参与了这个过程6〕,我们通过免疫组织化学方法检测手术切除胆管癌组织中BEG-1与VEGF的表达水平,探讨它们与胆管癌细胞恶性程度、病理分期的相关性.
         材料与方法 
         1一般资料:随机选取哈尔滨医科大学附属第二医院2000年I月至2011年12月在普通外科手术切除并经病理诊断证实的原发性胆管癌组织标本112例,年龄34一68岁,平均53岁,临床资料完整,所有病例术前均未接受放、化疗及免疫治疗.病理类型;112例胆管癌患者病理诊断腺癌95例,其他类型17例.
         TNM分期:I一fl期76例,111一Na期36例.病理分级:112例胆管癌中高分化22例、中分化37例、低分化53例淋巴结转移:伴淋巴结转移36例,无淋巴结转移76例取癌旁正常胆管组织作阴性对照.胆管癌的组织临床分期参照}%HO2000年制定的标准,病理组织学分级根据1}HO分级标准.主要试剂:兔抗人AEG-1蛋白的单克隆抗体(Abcam)购自晶美生物工程有限公司免疫组织化学超敏铸霉菌杭牛物素蛋自一过氧化物酶(sP}试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司.二氨基联苯胺(n}B)显色剂盒(z1,T-9o31)购自中杉金桥生物技术公司.
         2.标本制备及免疫组织化学sP法:_}EG-I抗体用磷酸盐缓冲液(PBS)1:500稀释为工作液病理标本均经10%福马林固定,常规石蜡包埋,厚4}i,m连续切片,5片蜡片薄膜贴于涂有多聚赖氨酸的载玻片上切片染色前常规脱蜡、水化,修复抗原,0.30}oH,0,溶液阻断内源性的过氧化物酶,全部操作过程按SP试剂盒说明完成.用已知的阳性切片作为阳性对照,用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照每次试验均设置阴性对照组.
         3.结果判定:以细胞质内呈棕黄色细颗粒状着色为AEG-1和VEGF蛋自表达阳性二参照综合染色强度和阳性细胞数(占总细胞数的百分比)来进行半定量处理.(1)染色强度按下列评分标准评分:细胞无显色者为0分,细胞呈浅黄色者为1分,细胞呈棕黄色者2分,细胞呈棕褐色者为3分;(2)阳性细胞数评分方法:阳性细胞占总细胞的0}7r一10}r者为0分,10}1}}50%者为1分,51%--800h者为2分,>80r'r者为3分上述两项评分(1)+(2),,4分者为高表达,<4分者为低表达.
         4.统计学方一法:应用SPSS11.0统计软件分析,采用Fishers精确检验及犷检验二分析BEG-1-ECF表达与临床病理因素的关系.
         结果
         1.AEG-1在胆管癌及正常组织中的表达:在29例癌旁正常组织中,AEG-1均为低表达(图1_1),表达阳性率0%.而在112例胆管癌标本中,.BEG-1低表达32例(图1B)、高表达80例(图1C,表达;日性率71.40I0}AEG-1在胆管癌组织中的表达明显高于正常胆管组织(P<0.01,表1、AEG-1的表达与组织学分级(高分化45.5%、中分化64.9%、低分化86.8070),临床分期(I一II期61.8%,III一I`'a期91.7%)、淋巴结转移(无淋巴结转移61.8%、伴淋巴结转移91.7%)呈正相关(P<0.05),而与患者年龄、血清GA-199水平、病理类型、肿瘤大小无明显相关(P>0.O5表2).
         2.VEGF在胆管癌及正常组织中的表达:在29例癌旁正常组织中,VEGF均为低表达(图1D),表达阳性率为O}}c-112例胆管癌组织中,VEGF低表达33例(图1E),高表达79例(图1F),表达阳性率为70.5%、E(;F在胆管癌组织中的表达也明显高于正常组织(P<0.01,表1)此外,胆管癌组织中AEG-1表达与VEGF表达也呈密切正相关.
         讨论
         国内外胆管癌组织中AE和VEGF表达水平的相关报道尚少.我们收集112例胆管癌标本,通过免疫组织化学法发现胆管癌组织中AEG-1的表达比癌旁正常胆管组织上调,与国内外学者在其他恶性肿瘤中的报道一致二该结果提示AEG-1的表达可能参与了胆管癌的发生、发展过程,但具体机制有待进一步研究在肝细胞癌中,AEG-1通过活化细胞外信号调节激酶(ERK)激活}'nt通路,促进肝细胞癌的生长.前列腺癌中,抑制_4EG-1表达可正调控叉头框蛋白03a(FOX03a),同时负调控蛋白激酶B(Akt)的激活,从而促进细胞凋亡过程的进行H伙AEG-1对多种肿瘤的发生和发展起着重要的作用,有望成为肿瘤靶向治疗的靶点AEG-1允许癌细胞紧密贴在血管上,从而到达其他远处的器官另外,有研究结果显示这种基因使得癌细胞更加抗拒化疗药物Lg一,AEG-1能帮助肿瘤细胞紧贴上远距离的血管,因此对于癌症的扩散和转移意义重大,并且这种基因也导致了部分肿瘤对目前治疗恶性乳腺癌化疗药物的抗药性.
         我们对胆管癌标本相关临床病理特征与AEG-I表达水平的关系进行了统计学分析,可见AEG-1表达与胆管癌组织分级、TNM分期及淋巴结转移呈密切正相关,而与患者年龄、血清CA-I99水平、病理类型、肿瘤大小无明显相关,提示AEG-1与胆管癌预后有关,可作为胆管癌预后的检测指标.其机制可能是因为AEG-I表达可激活磷酸肌醇3激酶(PI3K)-Akt及核因子KB(NF-KB信号传导通路,上调基质金属蛋白酶(MMP)-2及MMP-9表达和下调E一钙豁蛋自(E-cadherin)表达,促进癌组织的生长及转移.
         本研究结果显示,在胆管癌组织中,AEG-1的表达和V'EGF的表达呈密切正相关,提示两者可协同调控胆管癌等恶性肿瘤发生、发展的过程,并存在一定的相互作用有研究结果显示,AEG-I可诱导}-EGF表达同时AEG-I激活PI3K-Akt通路,增加缺氧诱导因子1(HIF1)表达,HIFI又可促进、ECF的转录AEG-I可促进肿瘤的血管形成,并使血管形成相关因子如HIF1,Ang1和MMP-2表达上调,当人类脐静脉内皮细胞过表达AEG-I时,脉管形成会明显增强.相反,如经小十扰RNA(aiRN.A)敲除后,将明显抑制VEGF诱导脉管形成二国外有文献报道,EG-1能够使VEGF高表达,VEGF在很多肿瘤转移灶中过表达同时促进转移灶生长.VEGF作为特异性的血管内皮细胞分裂素,能够刺激体外培养的血管内皮细胞发生有丝分裂和迁移,作用于体内血管内皮细胞,引起内皮细胞分裂增殖,诱导血管形成,是目前已知的作用强的促血管生成因子VEGF是血管生成过程重要的正向调控因子,与多种肿瘤的生长、转移和预后密切相关.VEGF表达的上调将使肿瘤细胞侵袭、转移能力增强因此AEG-I与VEGF协同促进血管生长和肿瘤转移.随着肿瘤血管生成及有关血管生长因子的作用机制的研究的进一步深人,可能通过抗体或基因水平干预VEGF及其受体的作用,可以抑制血管生成,从而达到抑制肿瘤血管生成和生长的目的.
         本研究结果表明,AEG-1表达与胆管癌组织的临床病理特征呈明显相关,提示预后较差,其作为血管发生的重要调控因子与VEGF协同参与胆管癌的生长、转移和扩散,但两者的相互作用及具体作用机制还需进一步研究(本文图1见封四).
         参考文献 
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