淀粉样p蛋白(amyloid p protein,Aβ)在阿尔茨海默病( Alzheimer's disease,AD)的发生发展过程中起了关键作用[1],然而,目前仍缺乏拮抗AB的有效的治疗手段。近年来研究发现Exendin-4能减缓神经退行性疾病的发展过程,但关于Exendin-4对AD小鼠发挥神经保护作用的行为学实验报道,特别是关于对空间工作记忆能力的影响仍未报道。因此,本研究通过Y迷宫自发交替实验,观察Exendin-4预处理对Aβ1-42所致空间工作能力损害的保护效应,旨在为AD的预防和治疗提供一个新的思路。
l材料与方法
1.1试剂和动物:Aβ1-42和Exendin-4(Sigma公司)。清洁 级雄性SD大鼠230~ 250 g[山西省疾病控制中心,许可证 号:SYYK(晋)2003-003]。
1.2动物分组及处理:动物随机分为8组(n=10):对照组、5nmol/L Aβ1-42组、不同浓度(0.02、0.2和2nmol/L) Exendin-4、不同浓度Exendin-4+ Aβ1-42组。用10010水合氯醛腹腔注射麻醉(300 mg/kg)大鼠后,固定于脑立体定位仪。暴露颅骨,以前囟点( Bregma)为基准,用骨钻于拟插入给药导管的部位钻孔,将给药导管插入大鼠侧脑室(Bregma后0.8mm、中线旁开1.3mm),利用微量注射泵侧脑室给药。给药速度为0.5 μL/min,给药结束后留针5 min。
1.3 Y迷宫自发交替实验:Y迷宫由三个夹角为120°的支臂组成。实验开始时,将大鼠由三臂的交汇处放入,让 其自由探索8 min,记录分析各臂大鼠的进入顺序、进入 时间及进臂的总次数以及每次进臂的顺序,并计算进臂正确率。进臂正确率=进臂正确的次数/(进臂总次数-2) x。 1.4统计学分析:全部资料用均数±标准差(X±s)表示,数据采用SPSS18.0软件进行two-way ANOVA分析。
2结果
2.1 Aβ1-42显著损伤了大鼠的工作记忆能力:Aβ1-42组大鼠自发交替实验进臂正确率为42.61%±2.08%,显著低于对照组大鼠的66. 07% +1. 03%(P<0.05)。
2.2 Exendin-4预处理减轻了Aβ1-42引起的大鼠工作记忆伤害:0.02、0.2和2nmol/L Exendin-4对大鼠自发交替 均无产生影响(图1A),但0.2和2 nmol/L Exendin-4处理,却有效减轻了A31-42引起的大鼠工作记忆障碍(P<0.05)(图1B)。
2.3 Aβ1-42和Exendin-4不影响大鼠的进臂总次数:Aβ1-42、0. 02、0.2和2 nmol/L Exendin-4均未影响进臂总次数(图 2)。
参考文献:
[l] Puzzo D, Gulisano W, Aranci0 0, et al. The keystone of Alzheimer pathogenesis might be sought in Abeta physiology[J] . Neuroscience, 2015 , 307 : 26-36.
[2] Jia XT, Tian Y, Yuan L, et al. Exendin-4, a glucagonlike peptide l receptor agonist, protects against amyloid-β peptide-induced impairment of spatial leaming and memory in rats [J]. Physiol Behav, 2016, 159:72-79.
[ 3 ] Kim S, Moon M, Park S. Exendin-4 protects dopaminergic neurons by inhibition of microglia activation and matrix meto llo proteinase-3 ex[x]pression m an animal model of Parkinsoncs d sease[J]. J Endocrinol, 2009, 202: 431-439.