淋巴细胞亚群测定在同种异体肾移植术后的应用

作者：邬露丹 徐炜峰 丁金飞

作者单位：315041 浙江省宁波市医疗中心李惠利医院检验科　325000 温州医学院2002级医学检验专业实习生

【关键词】  肾移植

　　免疫排斥反应是引起实体器官移植失败的主要原因，其发生发展与患者的T、B、NK细胞水平有关。为了准确地反映患者体内的免疫功能，作者应用流式细胞仪，对120例临床肾移植术后患者外周血淋巴细胞亚群的值进行测定，同时对不同的分组情况进行分析，现报道如下。

　　1  资料与方法

　　1.1  一般资料  1995年3月至2006年12月，在本院接受同种异体肾移植（RT）手术的120例患者，男68例，女52例；年龄23～78岁。手术后常规剂量应用环孢素A、骁悉、强的松等抗排异药及新生霉素、氧哌嗪等抗炎药物。根据其术后是否顺利恢复，有无急、慢性排斥反应及各种并发症分组：(1)肾移植后顺利恢复组：38例肾移植术后6个月内，无急、慢性排斥反应，无各种细菌、病毒感染及各种手术并发症，给予环孢素A、骁悉、强的松等抗排异治疗，查肾功能正常。(2)肾移植后急排组：11例肾移植术后早期肾功能恢复正常。术后3个月内发生急性排斥反应，经激素冲击治疗，移植肾功能逆转。(3)肾移植后慢性排斥组：21例肾移植术后，8个月～11.5年间出现肌酐、尿素氮升高、尿蛋白等肾功能减退症状，被诊断为慢性排异反应，给予强的松，新塞地平等抗排斥反应治疗后有所稳定。(4)肾移植后有并发症组：20例肾移植术后有各种细菌、病毒感染如尿路感染、巨细胞病毒感染等给予头孢呋辛等抗感染治疗后身体及肾功能恢复良好者。(5)正常对照组：为本院健康体检者30例。

　　1.2  仪器与试剂  FACS Calibur流式细胞仪、试剂购置于美国B-D公司，包括荧光标记单克隆抗体试剂盒，溶血素（FACS Lysing Solution）等；美国贝克曼-库尔特公司的LH 750血球计数仪及其相应的配套试剂。

　　1.3  检测方法  取空腹静脉血，用EDTA抗凝，按照说明书要求，经四色荧光微球校准流式细胞仪后，用Simulset软件获取与分析，测得T淋巴细胞各亚群的百分比，同时通过检测患者的血常规，测得淋巴细胞值，把上面两数值相乘，得到每μl全血中T淋巴细胞亚群的值。见表1。

　　1.4  统计学处理  采用SPSS 12.0统计软件，所有资料均用（x±s）表示，采用成组t检验。

　　表1  肾移植术受者淋巴细胞亚群值测定结果（略）

　　与对照组比*P<0.05，＃P<0.01 

　　3  讨论
   
　　随着免疫抑制剂的不断推陈出新，肾移植作为治疗终末期肾衰竭的重要措施被较多地采用。移植术后患者会有多种不同的临床表现，其中每个个体的免疫状态的不同与其疾病的发生、发展、预后呈现一定的关系［1］。为全面评价肾移植受者的免疫状况，作者检测了肾移植术后临床表现不同的患者淋巴细胞亚群的值，分别代表TH、TC、NK、B四种主要淋巴细胞的分化抗原,可特异地反映受者机体细胞免疫及体液免疫的功能状态。
   
　　肾移植术后顺利恢复组大部分淋巴细胞亚群免疫表型阳性细胞数接近临床正常值，由于免疫抑制剂的联合应用对NK细胞有明显抑制作用［2］，又由于CSA对免疫系统的作用主要是抑制CD4+细胞及对T细胞的活化有重要作用的IL-2、IL-4等因子的基因表达，对CD8+细胞作用较小，所以该组患者CD3+、CD4+细胞和NK细胞都受到一定程度的抑制，其中NK细胞下降尤其显著(P<0.05)。肾移植术后急性排斥组CD3+、 CD3+～CD4+、CD3～CD19+细胞数增加明显（P<0.01），NK细胞数增加（P<0.05），CD4+／CD8+比值增高（P<0.01），在排斥反应发生前期，淋巴细胞值增加，虽然有许多细胞参与急性排斥，但T细胞是必需的，因为针对外源蛋白抗原的体液和细胞介导的免疫反应都需要CD4+ T细胞的识别后才会有一系列后续的效应。本实验中的NK细胞也有明显增加,此研究结果与国内外相关研究结论相吻合［3，4］，在同种器官移植排斥反应的效应阶段，可检测到NK细胞活性增高，且与排斥反应的程度有一定的相关性。因此，早期监测T、B细胞、NK细胞的变化对预测排斥反应的发生有重要意义。肾移植术后慢排组表现为CD3+、CD3+～CD8+细胞数增加（P<0.05），NK细胞数降低（P<0.01）、CD4+/CD8+比值下降（P<0.05），在移植免疫中，CD3+～CD8+细胞数增高即CTL对靶细胞的杀伤已成为免疫系统清除同种异体细胞重要的方式和途径，遏制CTL的活化才有助于延缓移植物的排斥；在本实验中可能促使排斥反应发生的NK细胞尽管有一定程度的抑制，但依然有慢性排斥反应的发生。究其原因，依据Banff分类标准，肾移植术后慢性排斥反应被定义为慢性同种移植肾病（Chronic allograft nephropathy）［5］,作为一种独立的疾病，它是由自身抗原依赖和非自身抗原依赖的多种因素作用的结果。
   
　　肾移植术后并发症组CD3+、CD4+和NK细胞数降低（P<0.05）、CD3+～CD8+细胞数增加（P<0.05），CD4+/CD8+比值降低（P<0.01），而CD4+ /CD8+比率的变化是预测感染与排斥的重要指标［6］，此结果提示可能有免疫抑制过量，导致感染发生的可能。所以作者通过观察肾移植受者外周血CD4+、CD8+ 、CD16+～CD56+、CD19+、CD4+ /CD8+的改变，有助于综合评价受者细胞及体液免疫状态，同时结合受者临床表现以及血肌酐，尿素氮,尿常规检验，移植肾B超形态，结合血中免疫抑制剂浓度的测定进行综合分析。能较为准确地了解移植术后患者的免疫状态，预测移植物排斥反应倾向，及时调整免疫抑制剂用量，为临床诊断、判断预后提供依据。

【参考文献】
  　　1 Thibaudin D, Alamartine E, Mariat C, et al. Long-term kinetic of T-lymphocytesubsets in kidney transplant recipients: influence of anti -T-cell antibodies and association with posttransplant malignancies.Trans -plantation，2005，80(10):1514～1517.

　　2 Vacher-Coponat H, Brunet C, Moal V, et al. Tacrolimus/mycophenolate mofetil improved natural killer lymphocyte reconstitution one year after kidney transplant by reference to cyclosporine/azathioprine. Transplantation， 2006，82(4):558～566.

　　3 Bravo Soto JA， Esteban de la Rosa RJ，Luna del Castillo JD，et al. Effect of mycophenolate mofetil regimen on peripheral blood lymphocyte subsets in kidney transplant recipients.Transplant Proc， 2003，35(4):1355～1359.

　　4 傅耀文,张志宏,李胜文, 等.T细胞亚群的检测在肾移植术后急性排斥反应时的临床意义. 中国免疫学杂志 , 1997, 13 (3):179～180.

　　5 Solez K,Axelsen RA ,Benediktisson H , et al. International standardization of criteria for the histologic diagnosis of renalallograft rejection : the Banff working classification of kidney trans-plant pathology. Kidney Int ,1993 ,44(2) :411～422.

　　6 费继光,吴培根,陈立中,等. 测定CD38+ CD8 + T 淋巴细胞在监测肾移植后巨细胞病毒感染中的作用. 中华肾脏病杂志,2002 ,18 (4) :251～253.