Alagille综合征2例临床特征及JAG1基因分析 1

【摘要】 目的对慢性胆汁淤积症患儿开展JAG1基因检测，以提高对Alagille综合征临床特征的认识和诊断水平。方法选取2例慢性胆汁淤积症伴多器官受累患儿为研究对象，收集其临床资料、实验室检查结果。抽取患儿外周静脉肝素抗凝血2 mL，采用聚合酶链反应和基因测序技术对JAG1基因26个外显子及其侧翼序列进行突变基因检测。结果l例患儿临床表现为慢性胆汁淤积、心脏杂音和特殊面容，肝穿刺病理检查显示胆管上皮缺乏，JAG1基因检测6号外显子新c.809_809delG(p．G270Dfs142)杂合突变，为异常氨基酸代替JAG1蛋白，导致JAG1蛋白截断，表皮生长因子(EGF)样重复序列部分丢失以及富含半胱氨酸区完全丢失；1例患儿典型的临床表现仅包括慢性胆汁淤积和特殊面容，JAG1基因检测第20内含子剪切位点已知IVS20-2_5delTAAG杂合突 变，导致剪切位点改变。结论发现1种尚未报道的JAG1基因新突变c.809_809delG(p．G270Dfs* 142)。对慢性胆汁淤积症伴多器官受累患儿开展Notch信号通路JAC1致病基因筛查，有助于临床Alagille综合征的诊断。

 【关键词】Alagille综合征；胆管缺乏；胆汁淤积；儿童；分子诊断 Clinical features and JAGl gene analysis of 2 cases with Alagille syndrome Guo Hongmei,Zheng Bixia,Li Mei. Departmen,t of Gastroen,terology,Nanjing Children's Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Nanjing 210008,China Corresponding author : Li Mei, Em,ail : Limei6389@ aliyun,. com
[Abstract] ob[x]jective To carry out the detection of JAGl gene in children with chronic cholestasis and to improve the diagnostic level and understanding of Alagille syndrome.Methods Two cases of chronic cholestasis with multiple organ involvement were selected as the research subjects and their clinical data,laboratory test results were collected. Two milliliter peripheral intravenous heparin anticoagulan blood was drawn from each patient. All fragments of 26exons of the JAGI gene were amplified by polymerase chain reaction - sequence ba[x]sed on typing method. Results One patient with chronic cholestasis,heart murmur and dysmorphic face showed bile duct paucity in liver biopsy and a novel heterozygous mutation c. 809_809delG( p. G270Dfs * 142) in 6 exon. Abnormal amino acid replaced JAGl protein and resulted in truncation of the JAGl protein. The part of epidermal growth factor( EGF) like repeats region loss and the cysteine rich region completely lost. One case with typical chronic cholestasis and dysmorphic face showed a known IVS20 - 2_5delTAAG heterozygous mutation which resulted in splice site changes. Conclusion A novel JAGl gene mutation c. 809_809delG( p. G270Dfs * 142) is helpful to screen JAGl gene of Notch signal transduction pathway for chronic cholestasis with multiple organs involvement in children.
[ Key words ] Alagille syndrome ; Bile duct paucity ;Cholestasis ; Child ; Molecular diagnosis Alagille综合征(AGS)是一种常染色体不完全显性 遗传性疾病。大多数病例是由于染色体20pll. 2-20p12上JAG1基因缺陷，少数(<lo/o)是由于NOTCH2突变…。肝脏组织标本小叶间胆管缺乏是AGS的组织学特征，典型表现为慢性胆汁淤积、先天性心脏病、后胚胎环、蝴蝶椎骨和典型的三角脸。国外文献报道发病率约为1/7万[2]，国内发病率目前尚不清楚，文献仅见个例 报道[3-5]。AGS常以慢性胆汁淤积为突出表现，为更好地了解我国AGS的临床表现及JAGI基因突变情况，本研究报道2例慢性胆汁淤积症患儿经JAG1基因检测明确诊断为AGS的临床特征和分子诊断结果。

 1资料与方法

 1.1 -般资料例1，男，3岁9个月。因发现肝功能 损害3年余，于3年前入住南京市儿童医院。患儿出生40d发现全身皮肤黄染，进行性加重，伴大便发白，小便深黄，于当地医院就诊，拟诊“先天性胆道闭锁”，建议行手术治疗，家长拒绝手术，自动出院。出院后自行口服药物保肝退黄。患儿10月龄后皮肤黄染逐渐好转，大便转黄，出现皮肤瘙痒，多次复查肝功能仍有异常，为明 确诊断再次住院，行肝穿刺检查。家族史：患儿父母体健，有1个哥哥，15岁，体健。体格检查：体质量12.5kg，轻度营养不良貌，前额突出、眼球深陷伴眼距中度增宽、尖下颌，全身皮肤、巩膜轻度黄染，心率100次/min，律齐，胸骨左缘第2肋间II/6级收缩期杂音，双肺呼吸 音清晰，腹软，肝脏肋下3 cm，剑突下2.5 cm，质软+，脾肋下未触及肿大，脊柱和四肢均无明显畸形。肝功能： 丙氨酸转氨酶( ALT)122 U/L，天冬氨酸转氨酶(AST)97U/L，碱性磷酸酶375 U/L，谷氨酰转肽酶(GGT) 420U/L，三酰甘油1.94mmol/L，总胆固醇8.56 mmol/L，总 胆红素40.78 μmol/L，结合胆红素21. 19 μmo/L，未结 合胆红素19. 06 μmol/L，总胆汁酸45 μmol/L，总蛋白 69.4 g/L，清蛋白44.6 g/L，球蛋白24.8 g/L。血铜蓝蛋白：正常。血肝炎病毒抗体全套检测：阴性。尿液气相色谱一质谱分析筛查代谢性疾病：正常。胸部X线片显 示：肺纹理稀少，右肺动脉主干显示不清，心腰凹陷，肺动脉瓣下狭窄可能，未见明显蝴蝶椎骨。心脏超声心动 图：未见明显异常。人院第3天全身静脉麻醉下经皮肝 穿刺检查，肝穿刺组织标本送电镜及光镜病理检查。肝脏病理检查：肝小叶结构存在，窦索结构清晰，肝细胞见 点状坏死，汇管区可见少量淋巴细胞浸润，汇管区有纤维增生。

免疫组织化学结果显示：乙肝表面抗原（一），乙肝核心抗原（一），丙肝抗原（一）。特殊染色：铜染色（一）。免疫组织化学标记示CK7（一）、CK19（一），CD34示汇管区(+)，Hepl（一），提示肝活检组织内胆管上皮缺乏（图1）。病理诊断：慢性肝炎(GISl)，胆管上皮缺乏。肝脏电镜检查：肝细胞排列较正常，肝细胞肿胀变形，胞质空淡，细胞内线粒体变圆，嵴模糊，糖原颗粒轻度减少，内质网扩张。肝细胞内可见散在的大小不均的色素颗粒样沉积。肝细胞间可见脂滴。肝内部分小胆管微绒毛脱落，少量胆汁淤积。肝窦扩张。

例2，男，2岁3个月，因皮肤黄染2年，于1年前在南京儿童医院消化科门诊就诊。体检：体质量11kg，轻度营养不良貌，前额突出、眼球深陷伴眼距中度增宽、尖下颌（图2A），全身皮肤、巩膜轻度黄染，心率110次/min，律齐，胸骨左缘第2肋间Ⅳ6级收缩期杂音，双肺呼吸音清晰，腹软，肝脏肋下2cm，剑突下2.5cm，质软+，脾肋下未触及肿大，脊柱和四肢均无明显畸形，双上肢关节伸侧可见黄色瘤，双手伸侧更明显（图2B）。肝功能：ALT311U/L．AST203U/L，碱性磷酸酶1259U/L，GGT622 U/L,三酰甘油2.49mmol/L，总胆固醇12.95mmol/L，总胆红素54μmol/L，结合胆红素25μmol/L，未结合胆红素29μmol/L，总胆汁87μmol/L， 总蛋白65g/L，清蛋白40g/L，球蛋白25g/L，血铜蓝蛋白：正常。血肝炎病毒抗体全套检测阴性。尿液气相色谱一质谱分析筛查代谢性疾病：正常。胸部X线片显示正常，未见明显蝴蝶椎骨。心脏超声心动图未见明显异常。