酶标仪参数及性能检测

 作者：曾俊，张丹桂，王革非，陈小璇，李康生

【摘要】 目的：检测Bio_Rad 3550UV型酶标仪是否仍能应用于精密的酶联免疫吸附实验(ELISA的检测。方法：对Bio_Rad 3550UV型酶标仪的一些重要参数(滤光片精度，检测结果可重复性，线性相关性以及通道间的差异等进行检测，同时与新型酶标仪作比较。结果：Bio_Rad 3550UV酶标仪各项重要参数均符合检测要求。结论：Bio_Rad 3550UV酶标仪仍然能应用于精密的ELISA检测。

【关键词】 酶标仪；性能检测；参数检测

　　酶标仪是实验室的常用贵重仪器，主要应用于酶联免疫吸附实验(ELISA，检测样本吸光度值。随着科学技术的不断发展，酶免疫分析法的自动化程度及精确性有了很大的提高，其在生物医学和临床检验中的应用越来越广泛。1993年我室购买了Bio_Rad 3550UV酶标仪，我们对该仪器的一些重要参数(滤光片精度，检测结果可重复性，线性相关性以及通道间的差异性等进行了检测，同时与新型酶标仪作了比较。

1 材料与方法

1.1 材料Bio_Rad 3550UV酶标仪(Bio_Rad公司，美国，SPECTRAMAX 190和SPECTRAMAX 340PC酶标仪(MD公司，美国，酶标板(biomat；DU 640紫外可见光分光光度计(BECKMAN公司，美国。重铬酸钾：配制质量浓度5mg/mL的重铬酸钾溶液，再对其进行连续倍比稀释得到T1～7，其质量浓度分别为5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078mg/mL。

1.2 方法

1.2.1 滤光片波长精度检查 采用高精度紫外可见光分光光度计对不同波长的滤光片进行光谱扫描，所得检测值与滤光片标定值之差称为滤光片的精度，精度＜5为正常，差值越接近于零说明精度越高［1］。

1.2.2 仪器的重复性检查 对同一孔用450nm波长［2］(参考波长630nm连续测5次，取高OD值(H、低OD值(L，计算重复误差率(dev/%((H_L/(H+L。重复误差率应≤0.5%。

1.2.3 线性相关性及通道间差异检测 取一排洁净的酶标板条(8个小孔杯，依次加入重铬酸钾溶液，每孔100μL，第8孔加入蒸馏水作空白对照。以酶标板架为载体，先后把酶标板条置于8个通道：①线性相关性检测：用450nm波长(参考波长630nm对每个通道连续检测5次，取均值，对吸光度与稀释度作线性相关分析。②通道间差异检测：取8个通道中的高OD值(H、低OD值(L，计算通道间差异率((H_L/(H+L。通道间差异率应≤1.5%。

1.2.4 与新型同类仪器比较 将同一样本分别在Bio_Rad 3550UV、SPECTRAMAX 190及SPECTRAMAX 340PC酶标仪上检测，对比分析检测结果。

2 结果

2.1 滤光片波长精度检查滤光片的精度如何直接影响仪器的灵敏度和检测结果。对本仪器的滤光片用分光光度计检测，滤光片的精度均小于5，说明滤光片质量可靠(表1。表1 分光光度计检测滤光片的精度

2.2 仪器的重复性检查

在仪器可测范围(OD 0.10～2.00内重复性误差率＜0.5%，在OD值低于0.005时误差较大(表2。表2 倍比稀释浓度重铬酸钾检测仪器的重复性

2.3 线性相关性及通道间差异检测

以质量浓度为横坐标，吸光度(OD值为纵坐标，线性方程为y=0.351x+0.032，r=0.998。通道间差异率(表3可见通道间的差异与吸光度相关，在仪器的佳测量范围(OD值0.15～1.50内通道间差异率低于1.5%［1］。表3 同一酶标条在不同通道间的OD值 *在同一通道上连续测5次后取均值

2.4 与新型同类仪器比较

对所测数据作统计学处理，在OD值(0.15～1.50范围内3台仪器间的差异无统计学意义(图1。图1 三台仪器对同一样本的检测值

　　3 讨论

我们采用的是双波长检测，参考波长630nm。因为在用单一波长检测时各孔间的差异较大(数据未列出，与报道一致［3］。通过与新型酶标仪比较，可知本仪器的OD值在0.10～1.50，检测结果比较准确。这与仪器的检测原理(Bouger_amberT_beer法则相符。根据对我室1993年购置的Bio_Rad 3550UV酶标仪各项重要参数检测结果及与二台新型酶标仪结果比较表明，Bio_Rad 3550UV酶标仪仍然能应用于精密的ELISA检测。

【参考文献】
［1］成军， 孙关忠， 郑怀竞, 等．酶标仪性能评价与鉴定的基本方法及其初步应用［J］． 中华医学检验杂志, 1998, 21(1: 50-51.

［2］苗丽， 杨冀洲， 王丽． 酶标仪自校验方法探讨［J］． 中国国境卫生检疫杂志, 2003, 26(4: 234-236.

［3］罗双龙． 酶标仪双波长与单波长比色测定抗HCV的比较［J］． 临床检验杂志, 1998, 16(6: 351.